Se implementó una prueba de tamizaje preliminar para evaluar la potencial inhibición ejercida por productos de origen natural y sintético sobre la actividad de la proteína Transcriptasa Reversa del virus VIH-1, en respuesta a la necesidad de disponer de un ensayo in vitro no radioactivo, relativamente rápido, que arroje resultados válidos, con costos moderados, bioseguro y de fácil acceso. Esta prueba se basa en la capacidad que tiene la proteína transcriptasa reversa viral para formar DNA de cadena sencilla (cDNA) a partir de RNA, utilizando deoxinucleótidos trifosfatados (dNTPs), proceso conocido como transcripción reversa. Para detectar la actividad de la proteína se realizaron ensayos fluorométricos in vitro, usando proteína recombinante sin purificar, y nucleótidos fluorescentemente marcados (Cy3-dCTP) como parte del sustrato. Las condiciones establecidas para la actividad de la proteína fueron 5µg/reacción de RNA total y 2µg/reacción de oligo-dT12-18, reflejadas en 43.6% de incorporación del nucleótido fluoromarcado.
Introducción
El virus de la inmunodeficiencia humana tipo uno (VIH-1), agente etiológico más agresivo del Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA), pertenece a la familia retroviridae, posee dos copias de RNA de cadena sencilla y polaridad positiva y requiere de un intermediario DNA para su proliferación (1). La replicación del virus se inicia con la transcripción reversa de la cadena viral RNA en una doble cadena DNA, la cual es posteriormente integrada en el DNA cromosomal de la célula hospedadora. Esta etapa proviral de síntesis de cDNA, crítica para el ciclo de vida retroviral, es catalizada por la enzima Transcriptasa Reversa viral (TR). La TR es biosintetizada como un producto del gen Pol, el cual también codifica para las proteínas proteasa (PR) e integrasa (IN). La poliproteína primaria de TR es luego procesada por la proteasa para dar un heterodímero de la TR-HIV-1 funcional que contiene las subunidades p66 (66KDa) y pSI (51KDa) (2).
Durante la replicación, la cadena RNA es copiada por la actividad DNA polimerasa dependiente de RNA (PDDR) de la TR, produciendo un híbrido RNA-DNA. La actividad RNAsa-H degrada específicamente el RNA viral del heteroduplex y finalmente la doble cadena de DNA viral es obtenida por la síntesis de la segunda cadena de DNA, por la actividad DNA polimerasa dependiente de DNA (PDDD) de la TR (3). Siendo la TR requerida para la síntesis inicial del DNA proviral, la inhibición de la polimerización de DNA a partir de RNA viral catalizado por TR, inhibe la replicación del virus (4, 5).
La introducción de terapias antiretrovirales ha mejorado la calidad de vida de pacientes con avanzada infección viral y previniendo o deteniendo la progresión de la enfermedad.
Esta es una versión de prueba de citación de documentos de la Biblioteca Virtual Pro. Puede contener errores. Lo invitamos a consultar los manuales de citación de las respectivas fuentes.
Artículo:
Los conjuntos difusos (3, 2) y sus aplicaciones a la topología y a las elecciones óptimas
Artículo:
Proceso de cualificación industrial para la detección distribuida de la deformación y la temperatura mediante fibras ópticas en depósitos de residuos nucleares
Artículo:
Nanotubo cónico de un electrón en campos eléctricos y magnéticos externos
Artículo:
Tecnología de investigación de casos basada en el procesamiento de datos de inteligencia artificial
Artículo:
Mejora del rendimiento electroquímico del material de cátodo LiNi1/3Co1/3Mn1/3O2 mediante el recubrimiento de doble capa con óxido de grafeno y SnO2 para baterías de iones de litio
Artículo:
Biocomercio : una estrategia de desarrollo endógeno para Risaralda
Artículo:
La necesidad de la planeación estratégica en las organizaciones industriales modernas
Artículo:
Un modelo de planeación estratégica integrada con cuadro de mando integral para organizaciones sin ánimo de lucro
Libro:
Ergonomía en los sistemas de trabajo