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Producción y purificación de anticuerpos aviares (IgYs) a partir de cuerpos de inclusión de una proteína recombinante central en el metabolismo del NAD+

Production and purification of avian antibodies (IgYs) from inclusion bodies of a recombinant protein central in NAD+ metabolism

Autor: Moreno-González, Paula A.; Díaz, Gonzalo J.; Ramírez-Hernández, María H..
Categoria: Ciencias naturales y subdisciplinas | Subcategoría: Química.
Año de publicación: 2013.
Editor:

Universidad Nacional de Colombia. Facultad de Ciencias. Departamento de Química.

.

Tipo de documento: Artículo | Formato: pdf. | Idioma: Español. | Tamaño: 1939 Kb.

Resumen:

El uso de gallinas para la producción de anticuerpos policlonales, reduce la intervención animal,  obteniendo además  una gran cantidad de anticuerpos. Las aves presentan mayor distancia filogenética entre sus antígenos y los de mamíferos ofreciendo altos porcentajes de anticuerpos específicos. La producción de anticuerpos requiere antígenos en cantidades considerables, por ello es creciente el uso de proteínas recombinantes para tales fines. No obstante,  la obtención de proteínas en sistemas heterólogos conduce frecuentemente a la precipitación en agregados insolubles de limitada utilidad (cuerpos de inclusión).

Este trabajo presenta una metodología para la producción de anticuerpos policlonales (IgYs) empleando cuerpos de inclusión (CI) como antígeno. Los CI purificados e inoculados corresponden a la Nicotinamida / Nicotinato Mononucleotido Adenililtranferasa (His-GiNMNAT) de Giardia intestinalis expresada en Escherichia coli. La purificación del antígeno se llevó a cabo mediante solubilización y renaturalización. Los anticuerpos se purificaron de la yema de huevo de gallinas imunizadas mediante dilución en agua, seguida de precipitación con sulfato de amonio al 60% y  afinidad tiofilica. Los anticuerpos fueron evaluados mediante inmunoblot empleando la proteína His-GiNMNAT. De una yema de huevo se obtuvieron 14,4 mg de IgYs, con alta pureza y con un reconocimiento de hasta 15ng de His-GiNMNAT. Se  mejoró la especificidad de los IgYs mediante una purificación adicional por afinidad al antígeno, lo cual permitiría su empleo para el reconocimiento de la proteína del parásito.

Materias: Bioquímica Reacciones químicas Anticuerpos

Subjects: Biochemistry Chemical reactions Antibodies

Palabras clave: Anticuerpos, IgYs, Cuerpos de Inclusión (CI), Giardia intestinalis, NAD+, NMNAT

Keywords: Antibodies, IgYs, Inclusion bodies, Giardia intestinalis, NAD+, NMNAT

DC.Title.spa
 Producción y purificación de anticuerpos aviares (IgYs) a partir de cuerpos de inclusión de una proteína recombinante central en el metabolismo del NAD+
DC.Title.eng
 Production and purification of avian antibodies (IgYs) from inclusion bodies of a recombinant protein central in NAD+ metabolism
DC.Creator
 Moreno-González, Paula A.; Díaz, Gonzalo J.; Ramírez-Hernández, María H.
DC.Subject.snpi.spa
 Bioquímica Reacciones químicas Anticuerpos
DC.Subject.snpi.eng
 Biochemistry Chemical reactions Antibodies
DC.Subject.spa
 Anticuerpos, IgYs, Cuerpos de Inclusión (CI), Giardia intestinalis, NAD+, NMNAT
DC.Subject.eng
 Antibodies, IgYs, Inclusion bodies, Giardia intestinalis, NAD+, NMNAT
DC.Description.spa

El uso de gallinas para la producción de anticuerpos policlonales, reduce la intervención animal,  obteniendo además  una gran cantidad de anticuerpos. Las aves presentan mayor distancia filogenética entre sus antígenos y los de mamíferos ofreciendo altos porcentajes de anticuerpos específicos. La producción de anticuerpos requiere antígenos en cantidades considerables, por ello es creciente el uso de proteínas recombinantes para tales fines. No obstante,  la obtención de proteínas en sistemas heterólogos conduce frecuentemente a la precipitación en agregados insolubles de limitada utilidad (cuerpos de inclusión).

Este trabajo presenta una metodología para la producción de anticuerpos policlonales (IgYs) empleando cuerpos de inclusión (CI) como antígeno. Los CI purificados e inoculados corresponden a la Nicotinamida / Nicotinato Mononucleotido Adenililtranferasa (His-GiNMNAT) de Giardia intestinalis expresada en Escherichia coli. La purificación del antígeno se llevó a cabo mediante solubilización y renaturalización. Los anticuerpos se purificaron de la yema de huevo de gallinas imunizadas mediante dilución en agua, seguida de precipitación con sulfato de amonio al 60% y  afinidad tiofilica. Los anticuerpos fueron evaluados mediante inmunoblot empleando la proteína His-GiNMNAT. De una yema de huevo se obtuvieron 14,4 mg de IgYs, con alta pureza y con un reconocimiento de hasta 15ng de His-GiNMNAT. Se  mejoró la especificidad de los IgYs mediante una purificación adicional por afinidad al antígeno, lo cual permitiría su empleo para el reconocimiento de la proteína del parásito.

DC.Source
 ...vistas.unal.edu.co/index.php/rcolquim/article/view/45879
DC.Identifier.virtualpro
 http://www.revistavirtualpro.com/biblioteca/produccion-y-purificacion-de-anticuerpos-aviares-igys-a-partir-de-cuerpos-de-inclusion-de-una-proteina-recombinante-central-en-el-metabolismo-del-nad-
DC.Identifier.issn-isbn
 ISSN:0120-2804 (versión impresa) ; 2357-3791 (versión online)
DC.Identifier.citacion
 Revista Virtual Pro, ,
DC.Language
 Español
DC.Relation
 
DC.Publisher

Universidad Nacional de Colombia. Facultad de Ciencias. Departamento de Química.

DC.Contributor
 
DC.Rights
 Derechos de autor:Atribución
DC.Date
 2013
DC.Type
 Artículo
DC.Format
 pdf
DC.Identifier.file
12989.pdf

Descarga: Producción y purificación de anticuerpos aviares (IgYs) a partir de cuerpos de inclusión de una proteína recombinante central en el metabolismo del NAD+.
Tipo de documento: Artículo | Formato: pdf. | Idioma: Español. | Tamaño: 1939 Kb.
Categoria: Ciencias naturales y subdisciplinas | Subcategoría: Química.
Fecha de publicación Virtual Pro: 2018-03-22.


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